Gambon meninggalkan sekolah pada usia 15 tahun untuk memulai magang teknik dan pada usia 21 tahun ia telah memenuhi syarat penuh. Namun, dia juga anggota kelompok teater amatir dan selalu tahu dia akan berakting, katanya kepada surat kabar The Herald pada tahun 2004.

Dia terinspirasi oleh aktor Amerika Marlon Brando dan James Dean, yang menurutnya mencerminkan kegelisahan remaja laki-laki.

Gambon membangun reputasinya di panggung pada tahun 1960an. Tahun 1980-an menarik perhatian lebih luas dengan peran utama dalam acara TV The Singing Detective tahun 1986, di mana ia berperan sebagai seorang penulis yang menderita kondisi kulit yang melemahkan yang imajinasinya menjadi satu-satunya jalan keluar dari rasa sakitnya. Pertunjukan tersebut membuatnya memenangkan salah satu dari empat BAFTA-nya.

Dia juga memenangkan tiga Olivier Awards dan dua pemain ansambel Screen Actors Guild Awards untuk Gosford Park dan The King's Speech.

Gambon diangkat menjadi Komandan Kerajaan Inggris pada tahun 1992 dan dianugerahi gelar kebangsawanan atas jasanya dalam drama pada tahun 1998, sesuatu yang dia sebut sebagai “hadiah kecil yang menyenangkan” – meskipun dia tidak menggunakan gelar tersebut.

Kepribadiannya yang nakal, dia sering mengarang cerita. Selama bertahun-tahun dia menunjukkan kepada sesama aktor sebuah foto bertanda tangan Robert De Niro yang dia tulis sendiri sebelum bertemu dengan aktor Amerika itu.